联系与区别丨HPLC中的相对响应因子与相对校正因子
作为实验室常见的分析手段之一，高效液相色谱(high performance liquid chromatography \ hplc)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”等。由高效液相色谱原理设计而成的机器，即我们在做分析实验中经常使用的高效液相色谱仪。hplc主要用于分析高沸点不易挥发的、受热不稳定的和分子量大的有机化合物等。
hplc的检测流程和原理：在检测系统中，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于不同的分配系数，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，样品溶液中组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，终数据以图谱形式输出。
在样品溶液中，不可避免的会有杂质，这时候就要引进“相对响应因子”和“相对校正因子”的概念。
相对响应因子(rrf)一般应用于原料药或者药物制剂色谱分析方法中，对有关物质(如杂质或者降解杂质)的精确定量或者活性药物原料(api)的纯度检查。作为重要的色谱方法学参数，rrf的值取决于化合物本身的紫外吸收光谱性质以及检测器波长，准确的rrf值对相关物质/杂质研究非常重要。
相对校正因子的计算方法为：
f=(a杂/c杂)/(a样/c样)
在中国药典中，“加校正因子的主成分自身对照法”规定计算方法为：
色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，计算各杂质含量。这里规定的“校正因子”计算方法是按内标法校正因子：
f=(a内标/c内标)/(a对照/c对照)
相对响应因子(rrf)与校正因子f的关系如下：
f=1/rrf= slope 主峰/ slope imp
其中：slope imp是指对应杂质的斜率，slope 主峰是指主峰的斜率。
需要注意的是，相对响应因子的数值不是一成不变的，一种物质在某种特定条件下，它的相对响应因子是针对自身而言的，如果条件改变，则响应因子数值也有可能改变。
在使用hplc时，应当考虑相对相应因子的影响，以免对数值造成误差过大。
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其中：slope imp是指对应杂质的斜率，slope 主峰是指主峰的斜率。
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