RetroNectin 逆转录技术和T细胞扩增方法
retronectin逆转录技术操作流程
retronectin技术可以显著提高逆转录病毒的转染效率，这一发现克服了向造血干细胞中导入基因的困难。现在，retronectin技术已成为使用逆转录病毒进行转染操作的常规选择，其操作流程大致如下：
1. 注射用水或灭菌蒸馏水充分溶解retronectin，调节浓度至1mg/ml。
2. 0.22 μm滤膜过滤retronectin溶液，分装后-20 ℃保存。
3. 用缓冲液将retronectin溶液稀释至20～100 μg/ml。
4. 将retronectin稀释液加入24孔板，每孔0.5 ml (建议用pbs缓冲液稀释retronectin后包被non-tissue cluture treated plate。
5. 室温放置4小时或4 ℃，避光，过夜。
6. 吸出retronectin溶液，每孔加入pbs终止液0.5 ml。
7. 室温放置30分钟。
8. 加入适量pbs清洗孔板。
9. 吸出清洗液，得到retronectin包被的孔板 (如果暂不使用，可以在孔中加入适量pbs，用胶膜将平板盖密封，避免retronectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前将pbs吸出) 。
10. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
11. 将病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。
12. 32 ℃放置4小时。
13. 吸出病毒保存液。
14. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。
retronectin刺激t细胞扩增方法
t-cell expansion protocol using retronectin reagent, gt-t551 t-cell medium, cultilife bags, and anti-cd3 mab.
1. retronectin和cd3单克隆抗体包被培养袋。
2. 同时，来自pbmc的t细胞用gt-t551培养基+il-2+血浆培养。
3.第4天，t细胞转移到培养袋，继续用gt-t551培养基+il-2+血浆培养。
4.第7天，添加更多gt-t551培养基+il-2。
5.第10天，分装两个培养袋，添加更多gt-t551培养基+il-2。
retronectin® 重组人纤维蛋白片段retronectin®是在大肠杆菌中产生的重组人纤维蛋白片段fn ch-296。当包被在培养瓶和培养板表面时，retronectin®能显著增强逆转录病毒介导的基因转移到哺乳动物细胞中。retronectin®重组人纤维蛋白片段和cd3单抗共同作用可刺激t细胞的增殖和分化。
品牌
货号
产品描述
包装
takara
t100b
retronectin®recombinant human fibronectin fragment
重组人纤维蛋白片段
2.5mg
takara
t100a
0.5mg
takara
t201
retronectin®recombinant human fibronectin fragment
重组人纤维蛋白片段，gmp级
2.5 mg 冻干粉
*
品牌
货号
产品描述
包装
takara
gt-t551 h3
淋巴细胞、dc细胞、nk细胞无血清培养基
1000 ml
订购retronectin欢迎您咨询华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司。红荣微再*代理takara cellartis ，rubicon产品。红荣微再（上海）生物工程技术有限公司以“传递科学价值，服务科学研究”为宗旨，主营干细胞、医疗、细胞治疗、器官再生四大板块的产品。
更多takara产品及免疫细胞治疗产品欢迎华雅再生医学旗舰公司：红荣微再（上海）生物工程技术有限公司 ：1500 1904 520。红荣微再-客服: 2395557778 经销商专员
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2. 0.22 μm滤膜过滤retronectin溶液，分装后-20 ℃保存。
3. 用缓冲液将retronectin溶液稀释至20～100 μg/ml。
4. 将retronectin稀释液加入24孔板，每孔0.5 ml (建议用pbs缓冲液稀释retronectin后包被non-tissue cluture treated plate。
5. 室温放置4小时或4 ℃，避光，过夜。
6. 吸出retronectin溶液，每孔加入pbs终止液0.5 ml。
7. 室温放置30分钟。
8. 加入适量pbs清洗孔板。
9. 吸出清洗液，得到retronectin包被的孔板 (如果暂不使用，可以在孔中加入适量pbs，用胶膜将平板盖密封，避免retronectin干燥，可于4 ℃保存4周。使用前将pbs吸出) 。
10. 逆转录病毒保存液 (-80 ℃) 于37 ℃水浴融解。
11. 将病毒液加入包被后的24孔板，每孔300 μl。
12. 32 ℃放置4小时。
13. 吸出病毒保存液。
14. 每孔加入待转染的细胞悬液400 μl (通常细胞浓度为1 × 105/ml) 。
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1. retronectin和cd3单克隆抗体包被培养袋。
2. 同时，来自pbmc的t细胞用gt-t551培养基+il-2+血浆培养。
3.第4天，t细胞转移到培养袋，继续用gt-t551培养基+il-2+血浆培养。
4.第7天，添加更多gt-t551培养基+il-2。
5.第10天，分装两个培养袋，添加更多gt-t551培养基+il-2。
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takara
t100b
retronectin®recombinant human fibronectin fragment
重组人纤维蛋白片段
2.5mg
takara
t100a
0.5mg
takara
t201
retronectin®recombinant human fibronectin fragment
重组人纤维蛋白片段，gmp级
2.5 mg 冻干粉
*
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takara
gt-t551 h3
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1000 ml
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