γ-氨基丁酸（GABA）含量试剂盒说明书微板法
本试剂盒仅供科研使用
γ-氨基丁酸（gaba）含量试剂盒说明书
（货号：ws6011w 微板法 96 样） 一、产品简介： 4-氨基丁酸（gaba）广泛分布在动植物体中。在动物体内 gaba 几乎只存在于神经 组织中。在植物中如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有 g a b a， 且与植物的环境应激反应有关。 4-氨基丁酸（gaba）在碱性溶液中与次氯酸盐和苯*反应生成蓝绿色物质，通过检 测该有色物质在 645nm 波长处的值，即可得出样本中 gaba 的含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 100ml×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 40ml×1 瓶 4℃保存 试剂二 液体 10ml×1 瓶 4℃保存 试剂三 液体 20ml×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、γ-氨基丁酸（gaba）含量测定： 建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织样本加入研钵中，加入 1ml 提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm， 4℃或室温离心 10min，取上清液待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液(ml)为 1：5~10 的比例进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200w，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000rpm 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（ml）为 500~1000：1 的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30 min，调节波长到 645 nm。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。 ③ 在 ep 管中依次加入： 试剂名称（μl） 测定管 对照管 样本 50 50 试剂一 30 330 试剂二 100 试剂三 200 混匀，沸水浴（95-100℃）10min，冰浴至室温，呈现蓝绿 色颜色，若浑浊需 12000rpm 离心 5min，取澄清的 200μl本试剂盒仅供科研使用 2 至 96 孔板中，于 645nm 处读取各管的 a 值。△a=a 测定 -a 对照（每个样本需做一个自身对照）。 【注】1.若测定管的 a 值大于 0.6，则需将样本进行稀释（用蒸馏水稀释），稀释 倍数 d 需代入计算公式重新计算。 2.若 a 测定-a 对照的差值在零附近徘徊，则可增加样本取样量（如增至 0.2g）， 则取样质量 w 代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.0102x - 0.0003，x 为标准品质量(μg)，y 为吸光值δa。 2、按样本质量计算: gaba 含量(μg/g 重量)=[(δa+0.0003)÷0.0102]÷(w×v1÷v)×d =1960.8×(δa+0.0003) ÷w×d 3、按细胞数量计算： gaba 含量(μg/104 cell)=[(δa+0.0003)÷0.0102]÷(500×v1÷v)×d =3.922×(δa+0.0003)×d 4、液体中 gaba 含量计算： gaba 含量(μg/ml)=[(δa+0.0003) ÷0.0102]÷v1×d=1960.8×(δa+0.0003)×d v---提取液体积，1ml； v1---样本加入体积，0.05ml； d---稀释倍数，未稀释即为 1； w---样本取样质量； 500---细胞数量，万。 附：标准曲线制作过程： 1 标准品母液（2mg/ml）：标准品临用前加 1ml 蒸馏水溶解。 2 把母液稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 1.2 mg/ml。也可根据实际样本来调整 标准品浓度。 3 按照测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
关键词：酶标仪 移液枪 水浴锅 离心机
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