琼脂糖凝胶电泳实验的操作方法
标签：电泳琼脂糖凝胶电泳 电泳设备 蛋白电泳 缓冲液
琼脂糖凝胶电泳是鉴定核酸、蛋白分子量的常用方法，通过琼脂糖凝胶电泳实验分析，可以有效地识别出核酸类型及dna片段的大小。
实验前准备：
1、琼脂糖凝胶：琼脂糖凝胶的配置浓度需要根据dna片段长度的大小而定。具体的琼脂糖凝胶的配置浓度参考范围如下：
2、缓冲液：核酸的电泳缓冲液主要有有tris-硼酸(tbe)、tris-乙酸(tae)和tris-磷酸(tpe)3种。实验中多选用tbe缓冲液，如果考虑成本因素的话也可以尝试使用tae缓冲液。tpe缓冲液磷酸盐浓度较高，在进行dna回收时容易形成沉淀。10xtbe缓冲液可以直接购买，也可以自行配制。
10xtbe缓冲液配制方法如下：
tris:108克
edta: 9.3克
硼酸:55克
加纯水到1000ul (ph为8.0～8.2之间) ，使用时用20倍的水稀释到0.5xtbe即可。
3、指示剂的使用
指示剂：在dna电泳实验中常用的指示剂主要为溴二甲蓝和二甲苯青等。碱性环境下的溴二甲蓝呈现紫蓝色，在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速率也不相同。比如：在0.6%浓度的凝胶中的迁移率与1kb长度的dna片段基本一致。而在1%左右浓度的琼脂糖凝胶中迁移速率与0.6kb长度的双链dna片段基本一致。
二甲苯青溶于水呈现蓝色，同样在浓度不同的凝胶中二甲苯青的迁移速率也是不相同的，比如在1%琼脂糖凝胶电泳时，其迁移速率大致与2kb双链dna接近。
4.染色剂的使用
染色剂：核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，琼脂糖凝胶实验较为常用的是eb染色，也就是溴化乙锭染色法。根据实际实验情况，可在凝胶电泳缓冲液中加入浓度为0.5ug/ml的溴化乙锭，或电泳后将凝胶置入浓度为0.5ug/mleb溶液中染色10-15分钟。即可看到条带。值的注意的是eb浓度如果过高会影响到条带的清晰度。
5.核酸电泳设备：
核酸电泳设备主要包括电泳仪、电泳槽、梳子等。
6.核酸电泳方法
（1）在用纯水清洗过的电泳槽里放置好梳子。
（2）将稀释好的0.5xtbe缓冲液加入三角瓶中，并加入定量的琼脂粉，根据实验要求配置好对应的琼脂糖凝胶。待冷却到60°c时即可加入eb。缓慢倒入电泳槽中凝固。
（3）待胶凝固后，箱电泳槽中缓缓加入0.5xbe浓度的tbe，加入量以淹没胶面2mm为宜。
（4）打开电源，进行电泳操作。
（5）根据电泳条带进行电泳分析比对。
苏州阿尔法生物实验器材有限公司13年专注于生物实验室仪器设备供应，包括生物反应器、发酵罐、电泳仪、电泳槽、低温冰箱、离心机、pcr仪，细胞培养试剂、实验耗材、移液枪等。咨询方式,
关键词：电泳设备 电泳仪 实验器材 实验室仪器设备 离心机
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2、缓冲液：核酸的电泳缓冲液主要有有tris-硼酸(tbe)、tris-乙酸(tae)和tris-磷酸(tpe)3种。实验中多选用tbe缓冲液，如果考虑成本因素的话也可以尝试使用tae缓冲液。tpe缓冲液磷酸盐浓度较高，在进行dna回收时容易形成沉淀。10xtbe缓冲液可以直接购买，也可以自行配制。
10xtbe缓冲液配制方法如下：
tris:108克
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3、指示剂的使用
指示剂：在dna电泳实验中常用的指示剂主要为溴二甲蓝和二甲苯青等。碱性环境下的溴二甲蓝呈现紫蓝色，在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速率也不相同。比如：在0.6%浓度的凝胶中的迁移率与1kb长度的dna片段基本一致。而在1%左右浓度的琼脂糖凝胶中迁移速率与0.6kb长度的双链dna片段基本一致。
二甲苯青溶于水呈现蓝色，同样在浓度不同的凝胶中二甲苯青的迁移速率也是不相同的，比如在1%琼脂糖凝胶电泳时，其迁移速率大致与2kb双链dna接近。
4.染色剂的使用
染色剂：核酸电泳后，需经染色后才能显现出带型，琼脂糖凝胶实验较为常用的是eb染色，也就是溴化乙锭染色法。根据实际实验情况，可在凝胶电泳缓冲液中加入浓度为0.5ug/ml的溴化乙锭，或电泳后将凝胶置入浓度为0.5ug/mleb溶液中染色10-15分钟。即可看到条带。值的注意的是eb浓度如果过高会影响到条带的清晰度。
5.核酸电泳设备：
核酸电泳设备主要包括电泳仪、电泳槽、梳子等。
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（2）将稀释好的0.5xtbe缓冲液加入三角瓶中，并加入定量的琼脂粉，根据实验要求配置好对应的琼脂糖凝胶。待冷却到60°c时即可加入eb。缓慢倒入电泳槽中凝固。
（3）待胶凝固后，箱电泳槽中缓缓加入0.5xbe浓度的tbe，加入量以淹没胶面2mm为宜。
（4）打开电源，进行电泳操作。
（5）根据电泳条带进行电泳分析比对。
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