智立中特CaES-17人食管癌细胞培养操作步骤
细胞名称caes-17（人食管癌细胞）
种属人
年龄（性别）
组织来源
生长特性贴壁
细胞形态上皮细胞样
背景描述
生长培养基dmem高糖＋10%fbs＋1%p/s
培养条件气相：空气，95%；co2，5%温度：37℃caes-17,人食管癌细胞株步骤：
caes-17（人食管癌细胞）接收后处理
1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将t25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去t25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完quan培养基。
4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完quan培养基。
5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
caes-17（人食管癌细胞）培养操作
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面t25瓶为类；
1.细胞冻存时，弃去培养基后，pbs清洗一遍后加入1ml胰mei，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和dmso，轻轻混匀，dmso终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
培养注意事项
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。caes-17人食管癌细胞因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养4~6小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8ml维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。
5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6.建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。
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caes-17（人食管癌细胞）接收后处理
1)收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将t25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去t25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完quan培养基。
4)如果细胞密度达80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完quan培养基。
5)接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。
caes-17（人食管癌细胞）培养操作
1）复苏细胞：将含有1ml细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4ml培养基混合均匀。在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的pbs润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液（0.25%trypsin-0.53mm edta）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面t25瓶为类；
1.细胞冻存时，弃去培养基后，pbs清洗一遍后加入1ml胰mei，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2.4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和dmso，轻轻混匀，dmso终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3.用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。caes-17人食管癌细胞因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养4~6小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8ml维持细胞正常培养，待细胞汇合度80%左右时正常传代。
5.请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6.建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7.该细胞仅供科研使用。
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