酶联免疫吸附测定(elisa)是一种免疫学技术,用于检测和测量特定蛋白质,如生物样品中的抗体、抗原和激素等。
如下图所示:我们将从以下两个方面对试剂盒进行研究:
首先我们从elisa试剂盒的产品组成去了解试剂盒:在科研实验中一般采用试剂盒进行测定。elisa试剂中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。详情如下图:
然后我们从elisa试剂盒的性能方面去了解:
1、检测范围:
建立线性范围:需测定9-11个浓度水平,每个浓度水平重复测定3-4次。
验证标称线性参数:需测定4-6个浓度水平,每个浓度水平重复测定3-4次。
所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定,最好在一天之内完成。
2、灵敏度:
示例:人il-13的可检测浓度为0.1 pg/ml (6次独立实验的平均值)。10个零标准品浓度od的平均值加上两倍sd,计算可检测浓度。
注意:灵敏度跟检测范围点不相等。
3、稳定性(重复性、精密性):
酶标板内精密度3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次,评估酶标板内的精密度。酶标板间精密度3个已知浓度的样本酶标板间重复检测6次,评估酶标板间的精密度。试剂盒一般板内变异系数小于10%,板间变异系数小于15%(统计学概念)所有样本应在一次运行中或几次间隔很短的运行中随机测定,最好在一天之内完成。批内精密度:是众多种类精密度中最基本的一个,它是在严格的相似条件下,所得到的最佳的精密度。批间精密度:指在同一实验室,由同一(组)操作员在同一仪器上,使用同一方法和同种、同一批号试剂,在一段时间内(一般为一个月或20个工作日)对同一测试样品(常用质控品)测量结果的精密度。我们的试剂盒控制板内,批内cv值在10%内,批间cv值在15%内。
4、准确度(回收率):
示例:5份健康人血清中加入3个不同浓度水平的人il-13,未加人il-13的血清作为本底,计算回收率。回收率的范围从82 %至110 %,平均回收率为98 %。
现在我们了解了产品的组成,那让我们来看看实验中所需要的仪器和设备吧!
关键词:吸附剂
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