液相色谱定量分析原理及相关知识点
液相色谱定量分析原理
在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物
液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量
定量的依据是:
被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
由已知量的标样可求得定量校正因子
定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
液相色谱定量分析的步骤
1、选择一个适合定量分析的色谱方法：
确认被检测组分峰,并达到分离度(r)大于1.5
确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
3、考查定量方法的准确度及精密度
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
鉴别需定量的色谱峰(定性)
定性鉴别每个要定量的色谱峰
先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分
进一步的确认(定性)
1、标准加入法
2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （pda：光谱图比较、谱库检索；ms：质谱图解析、谱库检索）
3、其它仪器方法
确认定量峰的一致性
确认色谱峰的一致性(纯度)
保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
色谱峰一致性(纯度)确认的方法
用光电二极管矩阵(pda)检测器比较光谱图
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