谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒（紫外分光光度法）
谷胱甘肽还原酶（gr）活性测定试剂盒（紫外分光光度法）
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：ba1117
产品规格：50管/48样
产品简介：
gr是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中gr被trxr取代)。gr催化nadph还原gssg生成gsh，有助于维持体内gsh/gssg比值。gr在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外gr还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
gr能催化nadph还原gssg再生gsh，同时不断消耗nadph生成nadp+；nadph在340nm有特征吸收峰，相反nadp+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率；来测定nadph脱氢速率，从而计算gr活性。
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5.0 ml蒸馏水，混匀。
试剂三：液体×1支，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、 1ml石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500-1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、gr 测定操作：
1、分光光计预热30 min以上，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min以上。
3、空白管：取1ml石英比色皿，加入850µl试剂一，100µl试剂二，50µl试剂三，充分混匀，于340nm处测定10s 和190s吸光度，记为a1和a空2，△a空白管= a空1-a空2。
4、测定管：取1ml石英比色皿，加入750µl试剂一，100µl试剂二， 100µl上清液，50µl试剂三，充分混匀，于340nm处测定10s和190s吸光度，记为a测1和a测2，△a测定管= a测1-a测2。
注意：空白管只需要测定一次。
三：gpx活性计算：
(1) 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在一定温度中，ph8.0条件下，每毫克蛋白每分钟催化1µmol nadph氧化。
gr酶活(u/mg prot)= [ (△a测定管-△a空白管)÷ε÷d×v反总×106] ÷(cpr×v样)÷t
=0.536×(△a测定管-△a空白管)÷cpr
(2) 按样本质量计算
活性单位定义：在一定温度中， ph8.0条件下，每克样本每分钟催化1µmol nadph氧化。
gr酶活(u/g)= [ (△a测定管-△a空白管)÷ε÷d×v反总×106] ÷(w×v样÷v样总)÷t
=0.536×(△a测定管-△a空白管)÷w
(3) 按细胞数量计算
活性单位定义：在一定温度中，ph8.0条件下，每104个细胞每分钟催化1µmol nadph氧化。
gr酶活(u/104cell)= [ (△a测定管-△a空白管)÷ε÷d×v反总×106] ÷(细胞数量×v样÷v样总)÷t
=0.536×(△a测定管-△a空白管)÷细胞数量
ε：nadph摩尔消光系数 6.22×103l/mol/cm；v反总：反应体系总体，1000µl=0.001 l；106：1 mol=1×106µmol；cpr：上清液蛋白浓度（mg/ml）；v样：加入反应体系中上清液体积，100µl =0.1ml；v样总：加入提取液体体积，1ml；w，样本质量，g；t：反应时间，3min。
注意事项：
1、样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻融；
2、试剂二须现配现用，配置完后，置于冰上；
3、测定前须先用1～2个样做预实验，确保180s内吸光值变化呈线性，哺乳动物组织一般须用试剂一稀释2～5倍；
4、细胞中gr活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中gr的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。
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产品简介：
gr是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中gr被trxr取代)。gr催化nadph还原gssg生成gsh，有助于维持体内gsh/gssg比值。gr在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外gr还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。
gr能催化nadph还原gssg再生gsh，同时不断消耗nadph生成nadp+；nadph在340nm有特征吸收峰，相反nadp+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率；来测定nadph脱氢速率，从而计算gr活性。
产品内容：
试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5.0 ml蒸馏水，混匀。
试剂三：液体×1支，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、 1ml石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取
1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（ml）1：5-10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500-1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3min）；然后10000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
二、gr 测定操作：
1、分光光计预热30 min以上，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min以上。
3、空白管：取1ml石英比色皿，加入850µl试剂一，100µl试剂二，50µl试剂三，充分混匀，于340nm处测定10s 和190s吸光度，记为a1和a空2，△a空白管= a空1-a空2。
4、测定管：取1ml石英比色皿，加入750µl试剂一，100µl试剂二， 100µl上清液，50µl试剂三，充分混匀，于340nm处测定10s和190s吸光度，记为a测1和a测2，△a测定管= a测1-a测2。
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三：gpx活性计算：
(1) 按蛋白浓度计算
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4、细胞中gr活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中gr的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。
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