细胞凋亡阳性对照试剂盒操作程序
细胞凋亡阳性对照试剂盒操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的depc处理，以抑制rna酶对mrna的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或apes。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的co2，所用培养基为dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1m pbs(ph7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 m pbs(ph7.2-7.6)，含有1/1000 depc。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%h2o2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mrna核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 m pbs(ph7.2-7.6)，含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次；37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。
14.dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
本试剂盒含有两种不同的细胞凋亡诱导试剂，试剂a和试剂b。细胞凋亡诱导试剂a(apopida)和试剂b(apobid)分别可以诱导hela、hek293、cho、cos等常见细胞的细胞凋亡。
由于细胞凋亡的诱导具有细胞特异性，细胞凋亡的机制也具有一定的细胞特异性，尽管细胞凋亡诱导试剂a和试剂b可以诱导常见的一些细胞的细胞凋亡，但是我们无法保证这两种试剂可以诱导任何一种细胞发生凋亡。细胞凋亡诱导试剂a和试剂b相互补充，可以诱导更多种类的细胞产生凋亡。本试剂盒至少可用于检测200个样品。
高密度聚乙烯polyethylene, high density9002-88-4
l-焦性麸质酸;l-焦性胶氨酸;l-2-吡咯烷酮-5-羧酸l-pyroglutamic acid;l-glutiminic acid;glutimic acid;glutamic acid lactam;α- aminoglutaric acid lactam;l-5-oxo-2-pyrrolidine carboxylic acid;(s)-(-)-2-pyrrolidone-5-carboxylic acid98-79-3
l-异赤丝藻氨基酸l-threonine;l-β-hydroxy-2-aminobutyric acid;(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutyric acid;(2s,3r)-(-)-threonine72-19-5
l-甲状腺素钠;l-甲状腺胺钠;3,5,3′,5′-四碘甲状腺-l-原氨l-thyroxine sodiumsalt;3,3′,5,5′-tetraiodo-l-thyronine sodium salt pentahydrate;sodium levothyroxine;levothyroxine sodium;eltroxin;thyroxevan;25416-65-3
l-甲状腺素;3,5,3′,5′-四碘-l-甲状腺原氨酸;3-[4-(4-羟基-3,5-二碘苯氧基)-3,5-二碘苯基]-ll-thyroxine;3-[4-(4-hydroxy-3,5-diiodophenoxy)-3,5-diiodophenyl]-l-alanine;β-[(3,5-diiodo-4-hydroxyphenoxy)-3,5-diiodophenyl]-l-alanine51-49-0
;l-β-对羟苯基-α-氨基丙酸;l-干酪氨基酸l-tyrosine;(s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propionic acid;3-(4-hydroxyphenyl)-l-alanine;l-α-amino-β-p-hydroxyphenylpropionic acid;l-α-amino- p-hydroxyhydrocinnamic acid60-18-4
淋巴细胞分离液lymphocyte separation media;
麦康凯琼脂;麦康克琼脂mac conkey agar;
氟化镁magnesium fluoride;afluon;sellaite7783-40-6
magnesium hydroxide (as);marinco h1309-42-8
magnesium stearate (as);dolomol577-04-0
magnesium trisilicate;magnesium silicate;magnesium mesotrisillicate14987-04-3
苹果酸malic acid;4455-77-0
丙二酰胺malonamide;propanediamide;108-13-4
丙二腈 99％malonic acid141-82-2
丙二腈;氰化亚甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;缩苹果腈malonitrile;methylene cyanide;dicyanomethane;cyanoacetonitrilemandelic acid (as);α-hydroxyphenylacetic acid;phenylhydroxyacetic acid;phenylglycolic acid;α-hydroxybenzeneacetic acid;dl-mandelic acid90-64-2
manganese chloride (as)7773/1/5
关键词：恒温箱
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2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的co2，所用培养基为dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1m pbs(ph7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 m pbs(ph7.2-7.6)，含有1/1000 depc。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
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5．暴露mrna核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 m pbs(ph7.2-7.6)，含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次；37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
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12.滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。
14.dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
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本试剂盒含有两种不同的细胞凋亡诱导试剂，试剂a和试剂b。细胞凋亡诱导试剂a(apopida)和试剂b(apobid)分别可以诱导hela、hek293、cho、cos等常见细胞的细胞凋亡。
由于细胞凋亡的诱导具有细胞特异性，细胞凋亡的机制也具有一定的细胞特异性，尽管细胞凋亡诱导试剂a和试剂b可以诱导常见的一些细胞的细胞凋亡，但是我们无法保证这两种试剂可以诱导任何一种细胞发生凋亡。细胞凋亡诱导试剂a和试剂b相互补充，可以诱导更多种类的细胞产生凋亡。本试剂盒至少可用于检测200个样品。
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丙二腈;氰化亚甲基;二氰甲烷;氰基乙腈;缩苹果腈malonitrile;methylene cyanide;dicyanomethane;cyanoacetonitrilemandelic acid (as);α-hydroxyphenylacetic acid;phenylhydroxyacetic acid;phenylglycolic acid;α-hydroxybenzeneacetic acid;dl-mandelic acid90-64-2
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