显色培养基的发展十年
（—）介绍
过去25年，显色培养基在临床获得了广泛的应用。过去10年，显色培养基的检测范围不断扩大，已包括铜绿假单胞菌、b族链球菌、艰难梭菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌以及一些耐药菌等。
显色培养基检测目标菌，是基于它们的酶活性。然而，这些酶活性并非100%菌种特异性的，因此还需使用酶底物作为代谢物以及选用选择因子。
大部分的显色培养基同时有选择和鉴别功能，能抑制无关菌群。它使得目标菌产生特别颜色，从而减少了待检菌的数量。它减少了劳动量，减少了试剂的使用，所需使用的生化试剂和血清学试剂更少。它能快速确证病原菌，减少了出报告的总花费时间。因为致病菌菌落带有颜色，比较显著，而不会被漏检，因而改善了的检出率。
（二）病原菌的检测
临床用于致病菌检测的显色培养基已有不少种，和传统培养基相比，显色培养基需要更少的验证试验，尤其对于那些近似目标菌的伴生菌。显色培养基的鉴别能力还体现在念珠菌显色培养基上。和传统的沙氏*平板相比，念珠菌显色琼脂可以鉴别不同种的念珠菌，而且还有助于耐药念珠菌的检测。
志贺菌产生的酶较少，因而限制了显色培养基的开发。然而，现在已发现所有志贺菌物种都合成β-核糖苷酶（ribosidase），可作为显色培养基开发的基础。
产志贺毒素大肠杆菌（stec）受到临床的重视。但一些stec的血清型菌种发酵*，因而限制了*麦康凯琼脂的临床应用。
从粪便中分离小肠结肠炎耶尔森菌，常用cin琼脂，它是基于该致病菌以*发酵为基础。但cin琼脂的局限是，一些其他肠杆菌科也能生长和发酵*。而显色培养基则能提高特异性。
图.himedia的小肠结肠炎耶尔森菌显色培养基，货号m2025（需添加剂fd034）
不动杆菌，尤其是鲍曼不动杆菌，是重要的院内病原体。对碳青霉烯类抗生素有耐药性的不动杆菌已引起了广泛关注，因为这些耐药菌非常难以治疗。曾有人评估不动杆菌显色培养基的灵敏度和特异性分别为91.7％和89.6％。
图.himedia不动杆菌显色培养基，货号m1938（需添加剂fd271）
（三）实验室自动化对显色培养基应用的影响
过去10年，临床实验室的显著变化是引入了maldi-tof质谱用于快速准确的鉴定微生物物种。但对于诊断来说，先行培养仍然是大部分maldi-tof的先决条件。maldi-tof只是显色培养基的辅助手段。由于没有哪个显色培养基能保证的特异性，因而需要进一步的菌种鉴定。
maldi-tof的主要好处是将病原菌的鉴定时间减少到1个小时以内，并降低了鉴定的成本。maldi-tof质谱能弥补一些培养基特异性缺乏的问题，但不能解决培养基灵敏度的问题。
实验室自动化涵盖了样本的平板接种、菌落自动计数和分析。数字自动成像软件可以观察到菌落颜色像素的差异。显色培养基特别适合数字自动化。可以在软件上设定颜色阈限，以区分出目标菌。其他有好几项研究也发现，数字成像可以弥补一开始人为读数的漏检。
（四）显色培养基和分子诊断方法的比较
pcr、生物芯片和全基因组测序在临床诊断实验室已获得了应用。它们和传统培养法一起，同样存在方法上的利弊。个考虑因素是灵敏度。有研究发现，pcr和显色培养基培养法对于筛查艰难梭菌和*耐药的肠球菌具有
同等的灵敏度。然而，艰难梭菌培养后还需对毒素基因进行证实，而pcr的好处是一次即可同时完成。对于无乳链球菌，有报道说pcr法比显色培养基法更灵敏，但在肉汤增菌后，两种方法的灵敏度则没有区别。另有研究显示，对于mrsa的检测，如果有增菌这一步或者孵育时间达到48h，显色培养基的灵敏度是不亚于pcr的。
对于胃肠炎，传统诊断比较费事，需要培养（包括肉汤增菌）、镜下观察和免疫方法检测。对于一些病原菌如stec，分子诊断比培养法更有优势。有人对13974个粪便样本进行检验，发现除了沙门氏菌之外，其他如空肠弯曲菌、志贺菌等，多重pcr法比传统培养法更有优势。有些商品化的平台还可自动完成核酸提取、逆转录和扩增、分析，可在1小时内检测22种病原体。
pcr结果可在几小时内出来，而培养法要在18h-48h后。但pcr比培养法的价格要高。对耐药菌和耐药基因同时检测时，应进行方法互补。如果pcr法发现了耐药基因，则通过培养法检出耐药菌，并对该菌种并进行药敏试验。总之，培养法分离病原体仍然是一种重要方法，它可进行药敏试验，监测感染的爆发，并将感染原因与初源头（如污染的食品）联系起来。
尽管分子方法看上去存在一些优势，但也仍存在些固有不足。如：对药敏试验前需先分离病原菌，这一点pcr法无法实现。pcr的另一个问题是存在新基因和基因变异。例如，一个病原体携带一个耐药新基因，它可能逃避pcr的检测，而它因为表达耐药表型，却能被显色培养基给检出来。
参考文献：
perry jd. 2017. a decade of development of chromogenic culture media
for clinical microbiology in an era of molecular diagnostics.clin microbiol rev. 30:449–479.
himedia公司是微生物产品生产商，一直致力于微生物培养基和细胞培养基的研发和生产，其显色培养基有80多种，涵盖各个领域，包括无动物源成分及化学限定的，并具有who gmp认证、iso9001：2008，iso13485：2003认证，ce认证和fda注册登记。其产品行销140多个。
缔一生物作为himedia公司在中国的代理商，在微生物培养和检测领域，一如既往地为您带来的服务。
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