确认RNA的质量常用的三种方法
实时荧光定量pcr技术是通过测定rna的转录水平来评估基因的活力。rna样本提取的质量直接影响基因表达分析。影响rna品质的因素有以下三种：rna浓度、rna纯度和rna完整性。
检测rna浓度、纯度和完整性的方式主要有以下几种：
紫外分光光度计法：
测量260nm吸收值计算rna浓度，测量260nm/280nm吸收值的比值，用于评估rna纯度。需要注意的是：在检测核酸物质时应该在固定的ph溶液中进行。
260nm/280nm的比值范围在 1.9~2.1 之间。＜1.9，说明有蛋白质残留；＞2.1，说明rna可能发生降解。
琼脂糖凝胶电泳：
完整的rna通常有三条带，最亮的是28s条带，其次是18s条带，最淡的是5s条带（部分试剂盒提取时会过滤掉5s条带）。通过琼脂糖凝胶电泳可以检测28s和18s的比值。该方法主要用于检测rna的纯度和完整性。
如果28s和18s条带明亮、清晰、条带锐利，28s的亮度在18s条带的两倍以上，我们认为rna的质量。
若rna条带出现弥散，原因可能：rna被核酸酶降解、电压或电流过大、上样量过高或过低等。
上述两种方法在实验室比较常用，此外还有几种检测方式供大家选择。
荧光染料检测：
通过荧光染料和rna结合，荧光活性增强。此方法的灵敏度较高，主要用于检测rna的浓度。
微毛细管电泳：
可使用软件的rin（rna integrity number）分数评估，10为rna完整性最好，0为最差。此方法的灵敏度和分辨率较高，可用于检测rna浓度、纯度和完整性。
3’-5’完整性检测：
是在一个rna样本中检测gapdh mrna的完整性来代表所有rna的完整性，主要用于检测rna的完整性。
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