指纹谱图做不好?

2015版《中国药典》规定“*”要做指纹谱图,要求:
1、与标准图谱的相似度:除6号峰外,计算特征峰1〜7 号与s峰的相对保留时间,其中1号峰的相对保留时间在规定值的±5%之内,其余特征峰的相对保留时间在规定值的±8%之内。规定值为:0.58(峰1)、1.0(峰2 )、2.38 (峰3 )、2.61(峰4)、2. 65(峰5)、4. 94(峰7)。
2、4号峰与5号峰的分离度不得低于1.0。
对此,各药企实验室普遍反映做出来的谱图效果较差,不符合药典要求。月旭科技特此验证本实验,发现采用ultimate®lp-c18色谱柱*遵从药典方法条件下,可以符合药典要求。
流动相配置
流动相a:色谱级乙腈;
流动相b:取0.1ml的磷酸置1000ml超纯水中,超声脱气,即得。
样品溶液配置
对照品溶液:取(r,s)-告依春、连翘苷对照品适量,精密称定,加70%甲醇制成浓度分别为0.02mg/ml、0.06mg/ml的混合溶液,即得;
供试品溶液:精密称取*样品25ml,用乙酸乙酯振摇提取6次,每次25ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加70%甲醇溶解,置10ml量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀,即得。
色谱条件
色谱柱:月旭 ultimate®lp-c18(4.6×250mm,5μm)
流动相洗脱程序:
柱温:30℃
检测波长:236nm
流速:1.0ml/min
进样体积:10μl
实验图谱
1)对照溶液
2)样品
3)供试品放大图
结论:
相对保留时间均在药典规定范围内;
峰4与峰5的分离度为1.34,可以达到药典要求的1.0要求。

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