活化T-细胞核因子2(NFATC2)ELISA试剂盒​操作步骤

活化t-细胞核因子2(nfatc2)elisa试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/l,120 ng/l ,60 ng/l,30 ng/,15 ng/l)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48t的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48t的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂a50μl,再加入显色剂b50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(od值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠(mouse camp)
小鼠环磷酸鸟苷(mouse cgmp)
小鼠睫状神经营养因子(mouse cntf)
小鼠可溶性cd36分子(mouse scd36)
小鼠scd40配体(mouse scd40 ligand)
小鼠cd34(mouse cd34)
小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(mouse scd40l)
小鼠补体c3a(mouse c3a)
小鼠补体c5a(mouse c5a)
小鼠血清总补体(mouse ch50)
小鼠肌酸激酶(mouse ck)
小鼠肌酸激酶同工酶(mouse ck-mb)
小鼠羟甲基赖氨酸(mouse cml)
小鼠c-肽(mouse c-peptide)
小鼠心肌钙蛋白t
小鼠粒细胞集落刺激因子(mouse g-csf)
小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse gm-csf)
小鼠巨噬细胞集落刺激因子(mouse m-csf)
小鼠(mouse cytochrome c)
小鼠双链dna(mouse dsdna)
小鼠多巴胺(mouse dopamine)
小鼠二胺氧化酶(mouse dao)
小鼠d-二聚体(mouse d-dimer)
小鼠二肽基肽酶ⅳ(mouse dpp4)
小鼠β内啡肽(mouse β-ep)
小鼠表皮生长因子(mouse egf)
小鼠表皮生长因子受体(mouse egf r)
小鼠内皮素-1(mouse endothelin-1)
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse eotaxin)
小鼠促红细胞生成素(mouse epo)

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