大肠杆菌菌株的分型及区别简介

1:dh5a菌株
dh5a是一种常用于质粒克隆的菌株。e.colidh5a在使用puc系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:f-,φ80dlaczδm15,δ(laczya-argf)u169,deor,reca1,enda1,hsdr17(rk-,mk+),phoa,supe44,λ-,thi-1,gyra96,rela1
2:bl21(de3)菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体t7启动子的表达载体(如pet系列)的基因。t7噬菌体rna聚合酶位于λ噬菌体de3区,该区整合于bl21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:f-,ompt,hsds(rbb-mb-),gal,dcm(de3)
3:bl21(de3)plyss菌株
该菌株含有质粒plyss,因此具有氯霉素抗性。plyss含有表达t7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:f-,ompthsds(rbb-mb-),gal,dcm(de3,plyss,camr
4:jm109菌株
该菌株在使用puc系列质粒载体进行dna转化或用m13phage载体进行转染时,由于载体dna产生的lacza多肽和jm09编码的laczδm15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:reca1,enda1,gyra96,thi-1,hsdr17,supe44,rela1,δ(lac-proab)/f’
5:top-/10菌株
该菌株适用于高效的dna克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型:f-,mcraδ(mrr-hsdrms-mcrbc),φ80,laczδm15,△lacⅹ74,reca1,araδ139δ(ara-leu)7697,galu,galk,rps,(strr)enda1,nupg
6:hb101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supe44,hsds20(rb-mb-),reca13,ara-14,proa2,lacy1,galk2,rpsl20,xyl-5,mtl-1,leub6,thi-1m110或scs110
大多数大肠杆菌菌株中含有dam甲基化酶和dcm甲基化酶,前者可以在gatc序列中腺嘌呤n-6位上引入甲基,后者在cca/tgc序列的第一个胞嘧啶c-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影响.部分限制性内切酶对甲基化的dna不能切割,如fbai和mboi等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如xbai,bcli等。而且甲基化只发生在特定序列,以xbai为例,只有在位点序列旁出现ga或tc,该xbai位才会被甲基化。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如sau3ai,dna识别切割位点与mboi相同;但不受甲基化影响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行dna的制备,如e.colijm110和链霉菌等,前者dam和dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的dna就能被上述酶切割。

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