dna提取纯化流程
你知道dna提取纯化流程有哪些吗?让我们一起来看看吧!
一、样本采集与保存
1.新鲜:新鲜样本中受到内源性核酸酶影响相对最小,得到dna质量相对更好。
2.适量:投入过多样本,后续样本裂解不充分从而影响dna提取情况,还会引入过多杂质及内源性核酸酶。
3.不同类型的样本在采集与保存时也会存在差异
4.植物组织保存时间:对于含有多糖多酚等次生代谢产物的衰老叶片可在4℃黑暗环境下饥饿1-2天;进行低温或冷冻保存可以避免内源性dna酶对样本中的dna进行一个降解。
5.动物组织保存时间:-20℃短期保存(1-3个月),-70℃长期保存;福尔马林固定时间8-24h内为宜,样本存放时间不宜超过1年;ffpe样本保存温度4℃,建议不超过3年。
二、样本处理方式
1.动物组织:液氮研磨或匀浆。
2.植物组织:液氮研磨(最推荐),研磨充分又保证样本处于低温条件下避免dna降解。
3.哺乳动物血液样本:dna存在于含有细胞核的白细胞中,而大量存在的红细胞会引入更多杂质和核酸酶,所以需要提前使用红细胞裂解液对红细胞进行去除。
4.细胞样本:贴壁细胞胰酶消化处理再做收集,悬浮细胞只要离心弃上清。
5.细菌样本:溶菌酶破壁处理,如金黄色葡萄球菌加入一定量的溶菌酶在37℃条件下孵育30min就可完成破壁的处理。
6.真菌样本:酶解破壁或液氮冻融或超声裂解法。
7.ffpe样本:脱蜡处理(二甲苯或矿物油类的物质进行脱蜡处理)。
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