ELISA双抗体夹心法操作方法
双抗体夹心法操作方法：
1.包被:用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时，洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml，37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2m硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以+、-号表示。也可测od值:在elisa检测仪上，于450nm(若以abts显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔od值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。
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3. 加酶标抗体:于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时，洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml，37℃ 10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2m硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以+、-号表示。也可测od值:在elisa检测仪上，于450nm(若以abts显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔od值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。
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