原位PCR分类
原位 pcr 技术(in situ pcr，is pcr )是 hasse 等人于 1990 年建立的技术，即在组织细 胞里进行 pcr 反应，当时称为“细胞内 pcr”(in cell pcr)。它结合了具有细胞定位能力的 原位杂交技术和高度特异敏感性的 pcr 技术的优点，能检测出细胞内单拷贝及低拷贝的靶 dna 或 rna。
该方法就是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片 段，在不破坏细胞的前提下，利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物。与原位杂 交相比，原位 pcr 技术大大提高了检测的灵敏度。原位技术既可以分辩鉴定带有靶序列的 细胞，又可以标出靶序列在细胞内的位置，对有效检测各种病原菌和从分子及细胞水平上研 究疾病的发病机理和临床转归过程具有重大的实用价值。
原位 pcr 技术作为一种病原体的检测方法，其标记物的类型可分为两种:非放射性标 记法和放射性标记法。非放射性标记法包括如、生物素、过氧化物酶等，后者放射性 标记法多采用放射性同位素 h3h 和 p32 等。
根据标记物掺入方法的不同，原位 pcr 方法分为两大类:即在反应体系中使用标记的 单核苷酸或引物的直接法原位 pcr(direct in situ pcr);所用引物和单核苷酸都不带任何标记 物，待反应结束后再用原位杂交技术检测特异性扩增片段产物的间接法原位 pcr(indirect in situ pcr)。现在临床上使用最多的是间接法原位 pcr，相对于直接法原位 pcr，它的特异 性更高。
另外还有一种叫做原位反转录 pcr 的原位扩增方法是指在进行 pcr 之前首先进行 反转录过程(rt)，将反转录的产物作为模板用于扩增，这个过程叫做原位反转录 pcr(in situ reverse transcription pcr，简称原位 rt-pcr)。近年出现的原位环式等温扩增，即在 is pcr 原理基础上进行了改进，穿透处理条件温和，细胞不易破碎，设计的环状引物使扩增产 物分子量大，不易扩散，扩增温度低且恒定，不使用 pcr 仪，细胞损失率大大降低。
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