中药活性筛选与活性追踪实验
dpph法实验方法原理dpph (2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基，2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一种比较稳定的脂性自由基，其n上有一个游离电子，其乙醇溶液呈紫色，在517 nm处有大的吸收峰。加入抗氧化剂以后，dpph捕捉一个电子与游离电子配对，紫色褪去，变为无色物质，在517 nm处的吸收消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。依此原理用分光光度计检测dpph自由基与试样液反应后吸光值的变化，可检定试样提供氢原子、清除自由基抗氧化的能力。该法简便易行，灵敏可靠，不失为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一。
实验材料虎杖厚朴黄芩地榆前胡绞股蓝麦冬葛根菊花白芍
试剂、试剂盒dpph无水乙醇二甲基亚砜*
仪器、耗材圆底烧瓶旋转蒸发仪真空干燥机酶标板酶标仪
实验步骤1. 中药材选择：学生自选4种药材
备选药材：虎杖、厚朴、黄芩、地榆、前胡、绞股蓝、麦冬、葛根、菊花、白芍
2. 中药提取
分别将适当切碎的中药材20 g放入250 ml圆底烧瓶中，各加入10倍量乙醇，回流提取1次，过滤后提取液用旋转蒸发仪浓缩，并用真空干燥机干燥，备用。
3. 试剂的配制
dpph溶液：称取3.2 mg dpph溶解于40 ml无水乙醇中，摇匀，备用。
提取物溶液：用二甲基亚砜(dmso)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液，备用。测定时稀释成相应浓度。
*溶液：dmso作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂，备用。
4. 活性药材的筛选
取10 μl的样品溶液放入酶标板中，再加入90 μl的dpph溶液，以*溶液做阳性对照，以dpph溶液作为标准，样品溶液为空白，室温放置30 min后，酶标仪517 nm测定，利用以下公式计算各种样品的清除率(k)，每个样品测定2次(按下图所示加样)。
k = [ 1 - (ae- a0) ] /(ad- ad0) ×100 %
式中：
ae-- dpph + 提取物混合溶液的吸光度
a0-- 提取物溶液的吸光度
ad-- dpph溶液的吸光度
ad0-- dmso+乙醇的吸光度
5. 活性药材的活性成分追踪
自主设计实验，对通过上述活性筛选出的活性的药材，进行提取和分离，对不同的流份进行进一步的活性追踪评价。
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dpph溶液：称取3.2 mg dpph溶解于40 ml无水乙醇中，摇匀，备用。
提取物溶液：用二甲基亚砜(dmso)作为溶剂配成浓度为5 mg/ml的溶液，备用。测定时稀释成相应浓度。
*溶液：dmso作为溶剂配成浓度为0.5 mg/ml的溶剂，备用。
4. 活性药材的筛选
取10 μl的样品溶液放入酶标板中，再加入90 μl的dpph溶液，以*溶液做阳性对照，以dpph溶液作为标准，样品溶液为空白，室温放置30 min后，酶标仪517 nm测定，利用以下公式计算各种样品的清除率(k)，每个样品测定2次(按下图所示加样)。
k = [ 1 - (ae- a0) ] /(ad- ad0) ×100 %
式中：
ae-- dpph + 提取物混合溶液的吸光度
a0-- 提取物溶液的吸光度
ad-- dpph溶液的吸光度
ad0-- dmso+乙醇的吸光度
5. 活性药材的活性成分追踪
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