HE染色实验操作大纲
he染色实验操作大纲
前言
he染色法，即是苏木精-伊红染色法。石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。易于被碱性或酸性染料着色的性质分别称为嗜碱性和嗜酸性；若于两种染料的亲和力都不强，则呈中性。一般的组织变化和组织产物都可以通过这一染色法显示出来。是形态学最常用的染色方法。
染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
材料与方法
1材料
1.1主要试剂
石蜡、无水乙醇、氨水、硫酸铝钾、碘酸钠、冰醋酸、甘油、苏木素、伊红
1.2溶液配制
pbs溶液：600ml的ddh2o中溶解8g nacl、0.2g kcl、1.44g na2hpo4和0.24g
kh2po4，用hcl调节溶液ph至7.4，定容至1l，滤器过滤后，高压灭菌，室温保存。
1.3主要仪器及耗材
正置显微镜、恒温烘箱、石蜡切片机、摊片机、移液器、水浴锅
数字切片扫描仪：滨松nanozoomer( s210）公司产品
2方法
2.1样本包埋与固定
（1）固定：根据需要取材后置于福尔马林中固定48小时后；
（2）洗涤与脱水：将固定后的组织用流水冲洗，去除残留的固定液和杂质。不同浓度的乙醇逐级脱水，50%、70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每级2小时。70%乙醇中可长期保存；
（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小时，纯二甲苯两小时，再一次纯二甲苯两小时；
（4）浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍各3小时左右；
（5）包埋：将浸好蜡的组织块放入装有蜡液的容器中，摆好组织块位置。待石蜡凝固后将周围多余的石蜡去除，准备切片；
（6）切片：将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧，固定蜡块底座或蜡块，调整蜡块与刀至合适位置，刀刃与蜡块表面呈5度角。调整切片机上的切片厚度为4-7μm，然后切片。
2.2he染色
（1）脱蜡：60℃、30min；二甲苯i 10min、二甲苯ii 10min；
（2）水化：将脱蜡后的切片经100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、双蒸水各3min；
（3）将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，流水冲洗；
（4）1%盐酸酒精分化0.5-1min；
（5）流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻；
（6）碳酸锂饱和水溶液反蓝1min后流水冲洗；
（7）入70％和90％酒精中脱水各10min；
（8）入酒精伊红染色液染色2-3min；。
（9）脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明；
（10）封片：将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用；
2.3图像采集
通过扫描，采集图片。
送样运输要求：
样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。
切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
关键词：移液器 显微镜 水浴锅 切片机 石蜡切片机
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染色结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。
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（2）洗涤与脱水：将固定后的组织用流水冲洗，去除残留的固定液和杂质。不同浓度的乙醇逐级脱水，50%、70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每级2小时。70%乙醇中可长期保存；
（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小时，纯二甲苯两小时，再一次纯二甲苯两小时；
（4）浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1～2小时，再先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍各3小时左右；
（5）包埋：将浸好蜡的组织块放入装有蜡液的容器中，摆好组织块位置。待石蜡凝固后将周围多余的石蜡去除，准备切片；
（6）切片：将切片刀装在刀片机的刀架上并固定紧，固定蜡块底座或蜡块，调整蜡块与刀至合适位置，刀刃与蜡块表面呈5度角。调整切片机上的切片厚度为4-7μm，然后切片。
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（1）脱蜡：60℃、30min；二甲苯i 10min、二甲苯ii 10min；
（2）水化：将脱蜡后的切片经100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、双蒸水各3min；
（3）将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，流水冲洗；
（4）1%盐酸酒精分化0.5-1min；
（5）流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻；
（6）碳酸锂饱和水溶液反蓝1min后流水冲洗；
（7）入70％和90％酒精中脱水各10min；
（8）入酒精伊红染色液染色2-3min；。
（9）脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明；
（10）封片：将已透明的切片滴上中性树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用；
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切勿固定时间过长，切勿冷冻结冰。
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