出血性大肠杆菌O157：H7检测试剂盒说明书
出血性大肠杆菌o157：h7检测试剂盒说明书
广州健仑生物科技有限公司
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（一）生化管的使用方法
本安瓿瓶已在凹颈处有割口，请以瓶子上的蓝点为受力点，用手以柔力掰开（注意：如安瓿瓶上没有蓝点的，则用砂轮在安瓿瓶的凹颈处划痕，然后再掰开）！本鉴定盒配套的塑料帽已灭菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高压灭菌后方可弃去。
（二）出血性大肠杆菌o157：h7生化鉴定盒的详细使用方法
出血性大肠杆菌o157：h7为革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性，有周鞭毛，并有菌毛，不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖，不发酵或迟缓发酵*。氧化酶阴性。mug阴性。从分离培养平板上挑取可疑菌苔接种于每种微量生化管内。将已接种的生化管套上无菌塑料帽，直立于三折吸塑短架内，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。注意：如有特殊的接种方式或培养时间，请详见每种生化管附带的使用说明。
表1
产品名称
结果判定
培养时间
（小时）
使用说明
阳性
阴性
*
黄色
紫色
8－24
纤维二糖
棉子糖
蛋白胨水
红色
不变色
24
培养后加靛基质试剂2－3滴，立即观察结果。
西蒙氏枸橼酸盐
蓝色
不变色
24－48
用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。
鸟、赖氨酸脱羧酶
试验管蓝绿色，
对照管变黄
试验管与对照管均变黄
18－24
每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做终结果判定。
半固体琼脂
扩散生长
无扩散生长
24—48
用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种，竖立培育。
三糖铁琼脂
产酸变黄色，
产硫化氢变黑色
不变色
24
用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。
葡萄糖磷酸盐胨水
mr： 红色
不变色
96
培养后加mr试剂2－3滴，立即观察结果。
vp： 红色
不变色
48
培养后依次加入8滴vp试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
试验项目
结果判定
*
阴性或迟缓
纤维二糖
阴性
棉子糖
阳性
蛋白胨水
阳性
西蒙氏枸橼酸盐
阴性
*脱羧酶
阳性
赖氨酸脱羧酶
阳性
半固体琼脂
有动力或无动力
三糖铁琼脂
底及斜面呈黄色h2s阴性
葡萄糖磷酸盐胨水
mr 阳性 vp 阴性
备注：本鉴定盒是按照产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
（三）出血性大肠杆菌o157：h7的和生化鉴定特征（见表2）
表2 大肠杆菌o157：h7的生化特征
试验项目
结果判定
*
阴性或迟缓
纤维二糖
阴性
棉子糖
阳性
蛋白胨水
阳性
西蒙氏枸橼酸盐
阴性
*脱羧酶
阳性
赖氨酸脱羧酶
阳性
半固体琼脂
有动力或无动力
三糖铁琼脂
底及斜面呈黄色h2s阴性
葡萄糖磷酸盐胨水
mr 阳性 vp 阴性
注：“+” 阳性； “—” 阴性 ；“＋/－” 阳性或阴性
凡用于上述方法在被检食品中分离获得的纯菌落，经用抗e.coli o157：h7标准血清或ehec o157：h7。乳胶凝集试剂测试，呈阳性结果即可报告为该食品试样中检出肠出血性大肠杆菌o157：h7。
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（一）生化管的使用方法
本安瓿瓶已在凹颈处有割口，请以瓶子上的蓝点为受力点，用手以柔力掰开（注意：如安瓿瓶上没有蓝点的，则用砂轮在安瓿瓶的凹颈处划痕，然后再掰开）！本鉴定盒配套的塑料帽已灭菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高压灭菌后方可弃去。
（二）出血性大肠杆菌o157：h7生化鉴定盒的详细使用方法
出血性大肠杆菌o157：h7为革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性，有周鞭毛，并有菌毛，不产生芽孢的杆菌。发酵乳糖，不发酵或迟缓发酵*。氧化酶阴性。mug阴性。从分离培养平板上挑取可疑菌苔接种于每种微量生化管内。将已接种的生化管套上无菌塑料帽，直立于三折吸塑短架内，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。注意：如有特殊的接种方式或培养时间，请详见每种生化管附带的使用说明。
表1
产品名称
结果判定
培养时间
（小时）
使用说明
阳性
阴性
*
黄色
紫色
8－24
纤维二糖
棉子糖
蛋白胨水
红色
不变色
24
培养后加靛基质试剂2－3滴，立即观察结果。
西蒙氏枸橼酸盐
蓝色
不变色
24－48
用接种针挑取新鲜菌苔在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。
鸟、赖氨酸脱羧酶
试验管蓝绿色，
对照管变黄
试验管与对照管均变黄
18－24
每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做终结果判定。
半固体琼脂
扩散生长
无扩散生长
24—48
用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种，竖立培育。
三糖铁琼脂
产酸变黄色，
产硫化氢变黑色
不变色
24
用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。
葡萄糖磷酸盐胨水
mr： 红色
不变色
96
培养后加mr试剂2－3滴，立即观察结果。
vp： 红色
不变色
48
培养后依次加入8滴vp试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。
试验项目
结果判定
*
阴性或迟缓
纤维二糖
阴性
棉子糖
阳性
蛋白胨水
阳性
西蒙氏枸橼酸盐
阴性
*脱羧酶
阳性
赖氨酸脱羧酶
阳性
半固体琼脂
有动力或无动力
三糖铁琼脂
底及斜面呈黄色h2s阴性
葡萄糖磷酸盐胨水
mr 阳性 vp 阴性
备注：本鉴定盒是按照产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
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表2 大肠杆菌o157：h7的生化特征
试验项目
结果判定
*
阴性或迟缓
纤维二糖
阴性
棉子糖
阳性
蛋白胨水
阳性
西蒙氏枸橼酸盐
阴性
*脱羧酶
阳性
赖氨酸脱羧酶
阳性
半固体琼脂
有动力或无动力
三糖铁琼脂
底及斜面呈黄色h2s阴性
葡萄糖磷酸盐胨水
mr 阳性 vp 阴性
注：“+” 阳性； “—” 阴性 ；“＋/－” 阳性或阴性
凡用于上述方法在被检食品中分离获得的纯菌落，经用抗e.coli o157：h7标准血清或ehec o157：h7。乳胶凝集试剂测试，呈阳性结果即可报告为该食品试样中检出肠出血性大肠杆菌o157：h7。
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