悬浮细胞如何固定做免疫荧光？
悬浮细胞总是在孵抗体和洗的时候被冲掉，悬浮细胞做免疫荧光怎么固定？
传统方法
实验步骤：
1. 细胞在冰浴中冷却，然后用台式离心机于4℃以800 g 离心5 min，吸去培养液并以4℃pbs重悬细胞。
2. 离心吸去pbs，以1~2 ml 2%pfa固定液，或2%pfa固定液/0.1% triton x-100重悬细胞，置冰上固定30 min。
3. 离心、吸去固定液，用15 ml 4℃ pbs重悬细胞，放5 min 后，用pbs再次洗涤细胞。
4. 稀释的第一抗体于4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min，250 μl 抗体足够用于5x106细胞。
5. 离心细胞，吸去pbs，重悬细胞于第一抗体中，置4℃温育1 h。
6. 用4℃ pbs稀释细胞和抗体至15 ml。
7. 离心，吸去pbs，以4℃ pbs重悬细胞，重复1次。
8. 第二抗体4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min，5x106细胞用250 ul 抗体足够。
9. 吸去pbs，以第二抗体重悬细胞，4℃温育1 h，重复步骤6及步骤7。
10. 除非立即观察细胞，否则在进行细胞浓缩的下一步操作之前应以铝萡包裹离心管并冷藏。
11. 离心细胞并以少量pbs重悬（勿用水），将细胞悬液滴于多聚-l-赖氨酸覆层的载玻片上，加上盖玻片，尽可能马上观察结果。
镜下观察：没有细胞，原来掉片了！！！
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7. 离心，吸去pbs，以4℃ pbs重悬细胞，重复1次。
8. 第二抗体4℃用微量离心机以13 500 g 离心2 min，5x106细胞用250 ul 抗体足够。
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