《粮油检验 粮食中T-2 HT-2毒素的测定》征求意见
近日，由国家粮食和物资储备局组织起草的《粮油检验 粮食中t-2 ht-2毒素的测定 胶体金快速定量法》行业标准已形成征求意见稿，现向社会公开征求意见，截止日期为2023年5月17日，意见反馈邮箱tc270sc1@ags.ac.cn。
t-2/ht-2 毒素是由镰刀菌属中茄病镰刀菌(fusarium solani)等真菌代谢产生一种单端孢霉素类化合物，主要污染小麦、大麦、玉米、大豆等谷物及其加工制品，对人类健康及畜牧业构成了较大危害。
食品中 t-2/ht-2 毒素检测方法有高效液相色谱法，高效液相色谱-串联质谱联用法，这两种方法的前处理复杂，仪器昂贵，无法满足大批量食品样品快速筛查的需求，因此，寻求一种快速，准确，有效的 t-2/ht-2 毒素快速检测方法十分必要。
胶胶体金快速定量法是一种基于酶联免疫法的基础上结合单克隆抗体技术建立的新型检测技术，在粮食真菌毒素检测领域运用较为广泛，在黄曲霉毒素b1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和赭曲霉毒素 a 四种毒素上的检测，已十分成熟。本标准项目利用胶体金免疫层析技术对粮食中 t-2/ht-2 毒素定量分析，可提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障粮食质量安全和人民群众身体健康。
本文件按照 gb/t 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。参考gb/t 5491 粮食、油料检验 扦样、分样法；gb/t 6682 分析实验室用水规格和试验方法；gb/t 27404 实验室质量控制规范 食品理化检测等规程内容编制。
本文件规定了t-2/ht-2毒素总量的胶体金快速定量检测方法的原理、试剂、仪器设备及材料、样品制备、样品测定、结果描述和重复性。本文件适用于小麦、玉米等粮食及其制品中t-2/ht-2毒素的快速定量检测。
原理：
试样提取液中t-2/ht-2毒素与检测条中的胶体金微粒发生呈色反应，颜色深浅与试样中t-2/ht-2毒素含量相关。用读数仪测定检测条上检测线和质控线颜色深浅，根据颜色深浅和读数仪内置曲线自动计算出试样中t-2/ht-2毒素含量。
仪器设备及材料：
1.粉碎机：可使试样粉碎后全部通过 20 目筛。
2.天平：分度值 0.01 g。
3.漩涡振荡器。
4.滤纸：采用 whatman 2v(或等效)滤纸。
5.移液器：100 μl ～ 1000 μl、20 μl ～ 200 μl。
6.离心机：转速不低于 4000 r/min。
7.rosa t-2/ht-2 毒素胶体金快速定量检测条 1)：需冷藏储存，具体储存条件参照使用说明；技术要求见附录 a。
8.孵育器：可进行 45 ℃恒温(控温精度 ± 1 ℃)孵育。
9.读数仪：可测定并显示胶体金定量检测条的测定结果。
样品测定：
1.将胶体金检测条(6.7)从冷藏状态(2 ℃ ~ 8 ℃)取出放置至室温。将孵育器(6.8)预热至 45 ℃。将检测条(6.7)平放在孵育器(6.8)凹槽中，打开加样孔。
2.准确移取 300 μl 待测溶液(7.3)，加入检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器(6.8)盖。
3.孵育 10 min 后，取出检测条(6.7)观察 c 线(质控线)和 t 线(检测线)的显色情况。若出现下述情况，视为无效检测。1) c线不出现；2) c线出现，但弥散或严重不均匀；3) c线出现，但t1或t2线弥散或严重不均匀。
4.选择读数仪(6.9)的 t2 检测频道，并设定为基质 00(matrix 00)，开始样品测定，测定需在2 min 内完成，读数仪(6.9)自动显示样品中 t-2/ht-2 毒素的含量。
若读数仪显示“ + 250ppb”，需移取 300 μl 待测溶液(7.3)于离心管中，加入 1.0 ml 稀释缓冲液混匀后，按照 8.1 ～ 8.4 进行测定，其中基质设定为 01(matrix 01)。
结果表述：
试样中t-2和ht-2毒素总含量由读数仪自动计算并显示，单位为微克每千克(μg/kg)。方法检测限为5 μg/kg。
重复性：
在同一实验室，由同一操作人员使用同一仪器，按照相同的测定方法，对同一被测试对象相互独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值大于其算术平均值20%的情况不超过5%。
更多详情请见附件。
相关资料下载： cbc6a45b67934ac7b5b67cafd66c367f.zip 意见反馈表.doc
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食品中 t-2/ht-2 毒素检测方法有高效液相色谱法，高效液相色谱-串联质谱联用法，这两种方法的前处理复杂，仪器昂贵，无法满足大批量食品样品快速筛查的需求，因此，寻求一种快速，准确，有效的 t-2/ht-2 毒素快速检测方法十分必要。
胶胶体金快速定量法是一种基于酶联免疫法的基础上结合单克隆抗体技术建立的新型检测技术，在粮食真菌毒素检测领域运用较为广泛，在黄曲霉毒素b1、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素和赭曲霉毒素 a 四种毒素上的检测，已十分成熟。本标准项目利用胶体金免疫层析技术对粮食中 t-2/ht-2 毒素定量分析，可提高粮食样品检测、监测效率，降低成本，保护环境，保障粮食质量安全和人民群众身体健康。
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1.粉碎机：可使试样粉碎后全部通过 20 目筛。
2.天平：分度值 0.01 g。
3.漩涡振荡器。
4.滤纸：采用 whatman 2v(或等效)滤纸。
5.移液器：100 μl ～ 1000 μl、20 μl ～ 200 μl。
6.离心机：转速不低于 4000 r/min。
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1.将胶体金检测条(6.7)从冷藏状态(2 ℃ ~ 8 ℃)取出放置至室温。将孵育器(6.8)预热至 45 ℃。将检测条(6.7)平放在孵育器(6.8)凹槽中，打开加样孔。
2.准确移取 300 μl 待测溶液(7.3)，加入检测条加样孔中，关闭加样孔及孵育器(6.8)盖。
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